Selección espermática: La lucha por la supervivencia (II) Agosto 24, 2009
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Retomando : Selección espermática: La lucha por la supervivencia (I)
El Cervix: Nuevas dificultades
• Mucus cervical: Bajo la influencia de los estrógenos femeninos, el cérvix, secreta un mucus altamente hidratado que excede el 96% de agua. Dicha hidratación, está relacionada con la penetrabilidad espermática, de tal manera que cuanto más fluido sea, más fácilmente lo atravesaran los gametos masculinos. Perecerán aquellos con pobre hidrodinámica
• Respuesta inmune: La inseminación, estimula la migración de leucocitos, particularmente neutrófilos y macrófagos hacia el cérvix. Sin embargo, a este nivel y a diferencia de la vagina, los leucocitos no presentan una barrera significante para los espermatozoides con una motilidad normal, y se cree que su función principal, es la protección frente a microbios que puedan acompañar a los gametos masculinos. Además, IgG e IgA presentes en el cérvix están normalmente incrementadas en la fase folicular, pero decrecen en etapas cercanas a la ovulación.
• Anatomía cervical: Por último, cabe mencionar que las criptas que presenta el cérvix, son lugares muy propicios para que los espermatozoides queden atrapados y que , si por una parte, dan lugar a una pérdida del número de gametos, también proporcionan un lugar de almacenamiento de los mismos, pudiendo permanecer viables en dichos lugares, hasta 5 días tras la inseminación, y por tanto, ser capaces de salir, y fecundar el óvulo, días después del coito.
El útero
La cavidad del útero es relativamente pequeña, y los espermatozoides, pueden recorrerla en menos de 10 minutos a una velocidad de 5mm/min, que es su motilidad en medio acuoso. Además, son arrastrados por las contracciones del músculo uterino y asistidos por el mucus del cérvix, hasta llegar a la unión útero-trompas de Falopio.
Trompas de Falopio
El reservorio para los espermatozoides proporcionado a este nivel, se cree que es creado por la unión a carbohidratos de los epitelios que recubren las trompas de Falopio. Esta unión, conserva a los espermatozoides durante el almacenado. Teóricamente, los espermatozoides pueden liberarse de este epitelio, mediante una pérdida de los sitios de unión o bien por alteraciones en su membrana, para así llegar al óvulo para la fertilización. Por ello, se producen dos cambios fundamentales:
• Capacitación: Conlleva una serie de cambios en la membrana plasmática del gameto masculino, que reduce la afinidad por el epitelio de las trompas a las que estaba unido y prepara a éste para la reacción acrosómica y la fertilización
• Hiperactivación: Cambios en los movimientos flagelares que aumentan su amplitud. Esto, puede proporcionar la fuerza necesaria para sobrepasar la atracción entre el esperma y el epitelio y así liberarse. A veces, la hiperactivación, puede englobarse dentro de la capacitación.
Además de los cambios por parte de los espermatozoides, las señales hormonales de las hembras, que inducen la ovulación o incluso preovulatorias, pueden estimular al epitelio para favorecer la capacitación e hiperactivación.
Proximidades del ovocito
El impulso motor proporcionado por la hiperactivación de los espermatozoides, es un factor clave para la llegada al ovocito y su penetración. Los fluidos presentes en el tracto final del recorrido, se tornan viscoelásticos por los que es necesaria una mayor fuerza para atrvesarlos, así como para sobrepasar la membrana del cúmulo oóforo. De esta manera, aquellos espermatozoides, con fallos en los mecanismos de capacitación o con una motilidad disminuída, no llegarán jamás a atravesar la zona pelúcida.
Otro factor clave cuando el gameto masculino, realiza la capacitación, es la dirección que toma. Los movimientos experimentados tras la hiperactivación, son vigorosos y erráticos y por ello, ha de existir un sistema de control, o guía que les conduzca hacia el ovocito. Existen por lo tanto, dos sistemas complementarios que funcionan como guía de los espermatozoides:
• Sistema de termotaxis: Existe una diferencia de temperatura en diferentes secciones de las trompas de Falopio que conducen al gameto hacia el óvulo.
• Sistema de quimotaxis: En las proximidades del ovocito existen diversas sustancias que lo atraen hacia él, con mayor afinidad.
Continuará….
Bolas de siembra Mayo 10, 2009
Posted by munlait in Biotecnología, Ciencia, Investigación.add a comment
Debido a los infructuosos intentos de clonación que me vienen ocupando desde hace algunos meses, me he visto en la obligación de hacer producciones a gran escala de esta tarea (a ver si así sale algún día). Ya no permito empezar una clonación un lunes/martes, y llegar a ver los NO resultados el viernes por lo que me dedico comenzar el proceso casi a diario juntándome con un montón de placas para sembrar. El otro día, me junté con unas 40 placas para sembrar y hoy tocarán más o menos lo mismo, pero ahora cuento con una pequeña ayuda. Uno de mis compis de laboratorio al ver tan desproporcionada siembra, me dijo….” Sara, ¿has sembrado alguna vez con bolas?” (que no en bolas xD) y me quedé lógicamente con cara boba porque nunca había oído hablar de esa técnica.( a lo mejor es común que la enseñen en biología, pero en farmacia, pues no )
Unos segundos más tarde, me trae una gradilla con tubos de vidrio y bolitas de cristal dentro a lo cual , lo primero que solté fue si eran bolitas para hacer pulseras o collares.. Pues resuuuuulta, que esas bolitas de vidrio y esterilizadas se ponen sobre la placa de cultivo con las bacterias previamente añadidas, bueno, sobre una placa no (que no merece la pena) sino sobre unas cuantas placas que se quieran sembrar (modo césped) y alé! A darle brio al asunto! Se colocan unas placas sobre otras y se agitan para que las bolitas de vidrio se impregnen con las bacterias y de esa forma se vaya extendiendo por toda la placa. Después, como las bolitas son reutilizables, pues las quitas de la placa, un poco de lejía, al autoclave, y hasta la próxima vez 
Bien de tiempo me voy a ahorrar hoy en vez de sembrar con el asa….
Nociones de microscopía electrónica. Preparación de muestras Enero 26, 2009
Posted by munlait in Biotecnología, Ciencia, Investigación, Microscopía electrónica, Nanotecnología.1 comment so far
Coincidiendo con el inicio de mi aprendizaje en técnicas de microscopía electrónica, iré poco a poco añadiendo entradas sobre los nuevos conocimientos que vaya adquiriendo desde los primeros pasos de tratamiento de las muestras hasta el modelado molecular final (si Dios quiere)
El soporte
Para procesar la muestra, ésta debe estar contenida en un soporte. Para este fin existen unas pequeñas rejillas circulares que deben ser tratadas correctamente para que la muestra quede adsorbida a ellas. Dichas rejillas están formadas por dos caras de distinto material (en mi caso trabajo con Rubidio y Cobre) en donde en una de ellas ha de recubrirse con una fina capa de carbón pulverizado.
Sombreado
Para proceder a la pulverización del carbón sobre las rejillas ( sombreado), hace falta un proceso muy delicado en el cual se parte de un cubículo de mica que debe ser exfoliado en dos finas capas. Dichas, se han de colocar sobre una placa con su parte estéril hacia arriba y se tratarán en un instrumento que proporcione una fina capa de carbón sobre ellas en condiciones de vacío mediante la fusión de dos placas de carbón (una roma y otra puntiaguda).
- Micas exfoliadas. Rejillas y pinzas especiales
El resultado final en este punto consistirá en las capas de mica recubiertas de carbón, listas para recubrir a las rejillas.
Flotado
Para conseguir que el carbón quede sobre las rejillas, éstas se han de colocar sobre dos cuadrados de papel especial una a una bajo una “piscina” de agua. Posteriormente se añadirá una poco de etanol sobre la piscina de agua. Cuando esto esté realizado, se tomará con cuidado la mica sombreada y se le recortarán los bordes para facilitar el despegado del carbón y se acercará muy despacio uno de los lados de la mica para que entre en contacto con el etanol-agua. Manteniendo el pulso, poco a poco se verá que la capa de carbón se irá despegando de la mica, punto en el cual se introducirá esta última poco a poco en el líquido hasta que caiga al fondo el mineral, y quede el carbón flotando en la superficie con la forma cuadrangular de la mica.
Otro de los puntos delicados, es impregnar las rejillas con esa fina capa de carbón flotante. Dicho proceso es complicado puesto que por una parte la capa se mueve en la superficie y no se puede manipular por su disgregación, y el papel con las rejillas colocadas en filas al cogerlo con las pinzas se pueden caer. La única solución es la paciencia y el temple.
El resultado final serán un conjunto de rejillas impregnadas en carbón pero que aún no están listas para ser impregnadas en la muestra
- Rejillas finales
Ionización
Las rejillas han de introducirse en un instrumento que les dote de una elevada carga positiva que al contacto con la muestra (proteica y mayoritariamente negativa) quede más fuertemente unida. Dicha carga duran aproximadamente 30 minutos por lo que este paso es inmediatamente anterior al impregnado de la muestra
Tratamiento de la muestra
En una superficie estéril, se preparan 5uL de la muestra, una gota de agua destilada y filtrada y 5 uL de acetato de uranilo (agente de tinción).
Con cuidado se coge una rejilla correctamente tratada y se pone en contacto con la muestra del lado del carbón incubándola de 1 a 3 minutos. Pasado este tiempo se seca de lado con un papel de filtro, se sumerge en la gota de agua o buffer adecuado voloviéndola a secar y por último se impregna en el acetato de uranilo de 1 a 3 minutos con un secado final.
Una vez realizados estos pasos, la muestra estará preparada para ser observada en el microscopio electrónico.
