Coincidiendo con el inicio de mi aprendizaje en técnicas de microscopía electrónica, iré poco a poco añadiendo entradas sobre los nuevos conocimientos que vaya adquiriendo desde los primeros pasos de tratamiento de las muestras hasta el modelado molecular final (si Dios quiere)
El soporte
Para procesar la muestra, ésta debe estar contenida en un soporte. Para este fin existen unas pequeñas rejillas circulares que deben ser tratadas correctamente para que la muestra quede adsorbida a ellas. Dichas rejillas están formadas por dos caras de distinto material (en mi caso trabajo con Rubidio y Cobre) en donde en una de ellas ha de recubrirse con una fina capa de carbón pulverizado.
Sombreado
Para proceder a la pulverización del carbón sobre las rejillas ( sombreado), hace falta un proceso muy delicado en el cual se parte de un cubículo de mica que debe ser exfoliado en dos finas capas. Dichas, se han de colocar sobre una placa con su parte estéril hacia arriba y se tratarán en un instrumento que proporcione una fina capa de carbón sobre ellas en condiciones de vacío mediante la fusión de dos placas de carbón (una roma y otra puntiaguda).
- Micas exfoliadas. Rejillas y pinzas especiales
El resultado final en este punto consistirá en las capas de mica recubiertas de carbón, listas para recubrir a las rejillas.
Flotado
Para conseguir que el carbón quede sobre las rejillas, éstas se han de colocar sobre dos cuadrados de papel especial una a una bajo una “piscina” de agua. Posteriormente se añadirá una poco de etanol sobre la piscina de agua. Cuando esto esté realizado, se tomará con cuidado la mica sombreada y se le recortarán los bordes para facilitar el despegado del carbón y se acercará muy despacio uno de los lados de la mica para que entre en contacto con el etanol-agua. Manteniendo el pulso, poco a poco se verá que la capa de carbón se irá despegando de la mica, punto en el cual se introducirá esta última poco a poco en el líquido hasta que caiga al fondo el mineral, y quede el carbón flotando en la superficie con la forma cuadrangular de la mica.
Otro de los puntos delicados, es impregnar las rejillas con esa fina capa de carbón flotante. Dicho proceso es complicado puesto que por una parte la capa se mueve en la superficie y no se puede manipular por su disgregación, y el papel con las rejillas colocadas en filas al cogerlo con las pinzas se pueden caer. La única solución es la paciencia y el temple.
El resultado final serán un conjunto de rejillas impregnadas en carbón pero que aún no están listas para ser impregnadas en la muestra
- Rejillas finales
Ionización
Las rejillas han de introducirse en un instrumento que les dote de una elevada carga positiva que al contacto con la muestra (proteica y mayoritariamente negativa) quede más fuertemente unida. Dicha carga duran aproximadamente 30 minutos por lo que este paso es inmediatamente anterior al impregnado de la muestra
Tratamiento de la muestra
En una superficie estéril, se preparan 5uL de la muestra, una gota de agua destilada y filtrada y 5 uL de acetato de uranilo (agente de tinción).
Con cuidado se coge una rejilla correctamente tratada y se pone en contacto con la muestra del lado del carbón incubándola de 1 a 3 minutos. Pasado este tiempo se seca de lado con un papel de filtro, se sumerge en la gota de agua o buffer adecuado voloviéndola a secar y por último se impregna en el acetato de uranilo de 1 a 3 minutos con un secado final.
Una vez realizados estos pasos, la muestra estará preparada para ser observada en el microscopio electrónico.
Munlait 